【收藏】Seahorse XF实验常见问题及解答

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能量代谢研究使人们对生物学功能有了新的认识。事实上,近十年来一些最重大发现都与阐明能量代谢在细胞过程中的作用有关。

安捷伦 Seahorse XF 技术可以实时测定活细胞的能量代谢,提供与细胞活力和适应性直接相关的关键功能信息。Seahorse XF能量代谢检测系统,利用专利设计的非侵入、无标记式传感器,同时、实时测量活细胞的两条能量代谢通路,量化细胞代谢表型,从而分析细胞功能的变化。本文将为大家分享Seahorse XF实验中常见的问题及解答。

1.探针板水化超出水化时间怎么办?

安捷伦建议将探针板放入37℃CO2培养箱中水化过夜以得到最优结果。最短水化时间是37℃水化4小时,但是为得到最佳数据不建议采用这么短的时间。探针板最长水化时间是37℃水化72小时,但由于液体蒸发需要补充(或更换)水化液,因此37℃CO2培养箱务必放置水盘保证湿度。

2.Fluxpak和探针板有什么区别?

探针板是Fluxpak的组成部分,一个Fluxpak包含探针板、水化板、水化液和细胞培养微孔板。以上各消耗品数量因所购Fluxpak类型而不同。探针板不能单独订购,必须通过定购Fluxpak来购买,但细胞培养板可单独购买。

3.实验中为何必须设置空白孔/背景校正孔?

空白孔/背景校正孔被用来过滤掉实验的干扰因素,比如温度和 buffering capacity,这些干扰因素会影响氧含量和pH变化(非来源于代谢变化的影响)。背景校正孔还能被用来修正整板间温度波动,来诊断潜在温度问题,以及作为实验获得非期望数据时原因筛查的切入点。

4.为何细胞培养板需要在 37℃CO2培养箱中放置45-60min

细胞培养板在37℃CO2培养箱中孵育45-60min的目的是为了脱气,释放CO2

5.Seahorse XF报告生成器中的代谢数据是如何计算的?

在每个试剂盒的Seahorse XF报告生成器的用户指南中详细列出了数据的计算公式,请参阅。

6.请问进行FAO实验时,能够在探针板上加载BSA-palmitate使其在上机测量时自动注射入细胞孔吗?

安捷伦建议将BSA-palmitate或相似底物在培养细胞时做预处理。如果实验存在合理依据需在上机测量时通过注射加BSA-palmitate、血清或其他类似底物,请联系相关技术支持。

7.使用组织黏附剂处理细胞培养板会影响XF实验测量吗?

不会。使用诸如poly-L-Lysine fibronectin Gelatin poly-D-lysine Cell TakTM等组织黏附剂处理细胞培养板时,不会影响XF仪器测量的效果及实验参数分析。

8.XFp/XFe96细胞培养微孔板的每个细胞孔的最大体积是多少?

275 µL

9. XFe24细胞培养微孔板的每个细胞孔的最大体积是多少?

1000 µL

10.Seahorse XF检测液中需要加入抗生素吗?

无需加入抗生素,因为大部分XF实验在几小时内就结束了。

11.可以在Seahorse检测液中加入血清吗?

不建议加入血清(如:FBS),因为其会影响检测液的缓冲能力,并可能与进行检测的药物/化合物发生非特异性结合而影响检测效果。另外,使用加入血清的检测液溶解药物加载至探针板加药孔中进行注射时,会出现注射失败的情况。

12.加入底物的检测液在多长时间内可保持稳定?或可以提前配好检测液吗?

Seahorse检测液在实验当天现用现配。

13.为何不能使用XF base medium配制的检测液进行Glycolytic ratereal-time ATP rate两个实验?

XF base medium中含有酚红,该物质会影响这两个实验的测量。

14.为何不能使用GlutaMAX来代替Glutamine呢?

不建议使用GlutaMAX来配制检测液。因加入GlutaMAX后,还需细胞进一步将其转化为Glutamine,这可能会影响线粒体对Glutamine氧化的动力学过程。

15.检测液的pHXF实验非常重要吗?

是的,Seahorse XF实验通过测定细胞代谢物(如:氧和质子)的变化来确定OCR ECAR,而检测液pH会影响这些代谢物的产生或消耗,因此保持检测液一致的 pH37℃pH=7.4)非常重要。

16.FluxPak中的水化板可以替代细胞培养板吗?

不可以,虽然水化板与细胞培养板结构相同,但不能用来培养细胞。

声明:仅供研究使用,不用于诊断性操作。

版权说明:版权归原作者及安捷伦细胞团队,本文内容部分来源于美国安捷伦科技公司官网(www.agilent.com)。如有问题请联系小编,欢迎批评指正,衷心感谢!

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2021年11月8日 10:41
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